小腸結腸炎耶爾森氏菌是引起人類胃腸炎、腸系膜淋巴結炎甚至敗血癥的重要食源性病原體,尤其在低溫環境下仍可緩慢增殖,具有“嗜冷”特性。為實現快速、準確檢測,小腸結腸炎耶爾森氏菌顯色培養基因其高選擇性與直觀判讀優勢被廣泛采用。然而,其檢測效能高度依賴于前期樣品處理方式是否與其兼容。若前處理不當,可能導致目標菌被抑制、非目標菌過度生長或目標菌數量不足,從而造成假陰性或假陽性。因此,充分理解并優化樣品前處理與顯色培養基的兼容性,是保障檢測可靠性的關鍵環節。
一、不同樣本類型的前處理差異
臨床樣本(如糞便)通常含有大量正常菌群,需通過選擇性增菌提高耶爾森氏菌比例。常用方法包括在磷酸鹽緩沖液進行25–28℃冷增菌18–48小時,以抑制大腸桿菌等中溫菌,同時促進耶爾森氏菌生長。此增菌液可直接劃線接種至顯色培養基,兼容性良好。
食品樣本(如豬肉、乳制品、生鮮蔬菜)則需先均質化,并根據基質復雜程度選擇是否進行前增菌,再轉接至選擇性增菌液。高脂肪或高蛋白食品可能干擾顯色反應,因此前處理中應充分離心或過濾,減少雜質對培養基pH及顯色底物的影響。
環境水樣(如河水、加工用水)因目標菌濃度極低,通常需大體積過濾濃縮,再將濾膜放入增菌液中培養。此類前處理產生的樣本液成分較潔凈,對顯色培養基干擾小,但需注意濾膜殘留消毒劑(如氯)可能抑制細菌生長,必要時添加中和劑(如硫代硫酸鈉)。
二、前處理對顯色培養基性能的影響
顯色培養基依賴特定酶切割顯色底物產生顏色。若干擾物質(如食品色素、膽汁鹽殘留、抗生素代謝物)進入培養體系,可能抑制酶活性或改變菌落背景色,導致誤判。例如,未經充分稀釋的糞便懸液直接接種,可能因高濃度膽鹽抑制耶爾森氏菌生長,使其無法形成典型洋紅色菌落。
此外,前處理中使用的抗生素雖能抑制革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性菌,但若殘留量過高,可能對耶爾森氏菌本身產生輕微抑制,延緩顯色時間。因此,劃線前建議適當稀釋增菌液或采用中和步驟。
三、標準化與驗證的重要性
為確保兼容性,前處理流程應盡量遵循標準方法。這些方法已驗證其與主流顯色培養基(的匹配性。實驗室若自行優化前處理條件(如縮短增菌時間、更換緩沖液),需進行加標回收實驗,驗證目標菌回收率與顯色特異性是否達標。
四、操作建議
所有樣本增菌后應充分混勻再取樣接種;
避免將高濃度原始樣本直接涂布顯色平板;
對復雜基質樣本,建議設置未接種對照平板,觀察背景干擾;
記錄前處理參數(溫度、時間、稀釋倍數),便于結果溯源。
綜上所述,小腸結腸炎耶爾森氏菌顯色培養基雖具備優異的識別能力,但其效能發揮離不開科學、規范的樣品前處理。只有根據樣本類型合理選擇增菌策略、控制干擾因素,并與標準方法保持一致,才能保持顯色培養基的靈敏度與特異性,為食品安全與臨床診斷提供可靠依據。